荧光滤光片选择要点

荧光成为生命科学的重要研究工具不是偶然的。因为激发光和发射光波长不一样,因此可以将漫散射光和特异性荧光分开,只成像特异性荧光区域,从而实现特异性分子级功能研究。
将激发光/漫散射光和特异性荧光区分开的工具就是滤光片。滤光片广泛存在于使用荧光的科研仪器中,比如荧光显微镜、流式细胞仪、RT-PCR等。在显微镜中,滤光片通常存在于一个小方盒子中,如果我们打开这个盒子,会发现里面有三个不同的滤光片,其中两个是圆的,一个是长方形的。两个圆形的,分别是激发光滤光片和发射光滤光片,那个长方形的就是最重要的二向分色镜片。
之所以说二向分色镜片最重要,是因为将激发光/漫散射光和荧光发射光区分开就是二向分镜片的功劳。
激发光滤光片负责筛选合适激发光波长。比如将白光激发光筛选为蓝光,用于激发GFP等荧光素。如果用的是单波长的LED或者激光,激发光滤光片就不是必须的了。
发射光滤光片负责筛选需要的荧光发射光。当一个波长的激发光,能够激发不同发射光时,这个滤光片就可以将不同的发射光区分,比如同样可以用蓝光激发的FITC和PE。另外,因为很多生物学组织都有自发荧光,且自发荧光多处于红光区域,利用发射光滤光片可以过滤掉自发荧光干扰。如果一个样本只有一种荧光,而且没有自发荧光干扰,这个滤光片也是可以省略的。
二向色镜的作用是区分激发光和发射光,这个应该是必须的了。但也有仪器是可选的。绝大多数光路设计,采用的是二向分色镜,搭建方便,调节也方便。
那么问题来了,我们应该如何去选择适合我们所需的滤光片呢?
首先,需要确定所使用荧光素的激发和发射光谱。我们可以通过几个常用的网站,查询荧光素的光谱。比如Thermo旗下的Invitrogen/Molecular Probe网站,有比较好用的荧光光谱查看器,如果是一些流式细胞分析用荧光素,可能需要到对应的公司网站查询。
得到荧光光谱信息后,我们就可以针对性的选择所需的滤光片了。
我们可以将滤光片光谱与荧光素光谱重叠在一起,分析滤光片是否合适。
当然,在选择滤光片时,还需要考虑激光光源的光谱,特别是汞灯、金属卤素灯和白光LED,避免选择光源发射较弱的区域。
深圳市飞宇达光电供应或定制荧光成像系统光路中的三种滤光片:激发光滤光片,荧光发射光滤光片,二向分色镜片,欢迎来电咨询。

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Fluorescent filter selection points(Summary:Fluorescence has become an important research tool in life sciences, not accidental. Because the excitation light and the emission light have different wavelengths, the diffuse scattered light and the specific fluorescence can be separated, and only the specific fluorescence region is imaged, thereby realizing specific molecular level function research. Separating excitation/diffuse light from specific fluorescence)

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